SPE柱管形式和離心管形式是MAS法常用的兩種產(chǎn)品形式。
SPE柱管形式的使用流程如下圖:

將樣品上樣到預(yù)處理過(guò)的SPE柱;
在加入適當(dāng)量的洗脫液,靜置片刻,同步完成蛋白沉淀與分析物的提取;
加壓,使洗脫液勻速流過(guò)柱子,接收全部流出液;
接收液進(jìn)行后處理或直接檢測(cè)。
MAS還有離心管形式

將樣品及提取溶劑同時(shí)放入離心管中,震蕩或超聲提取;
加入SPE填料吸附凈化樣品基質(zhì)干擾,離心后檢測(cè)目標(biāo)物被留在了溶液里。
取上清液進(jìn)行后處理或直接檢測(cè)。
與常規(guī)的SPE方法相比,MAS法有很多的優(yōu)點(diǎn),尤其在藥物代謝分析領(lǐng)域中血漿樣品一般都采用直接蛋白沉淀法和常規(guī)SPE法來(lái)進(jìn)行樣品前處理,其中蛋白直接沉淀更多的偏重于血漿樣品中大分子蛋白的去除,與其相較,SPE可以更好的去除小分子蛋白

圖1是比較了蛋白直接沉淀,常規(guī)SPE及MAS方法處理過(guò)的牛血清空白樣品的色譜圖,由圖中可以看出,常規(guī)SPE處理過(guò)的血清樣品色譜圖2.5分鐘前的雜質(zhì)峰更少,而在2.5分鐘后卻又有兩個(gè)明顯的色譜干擾峰。正是證明了SPE對(duì)于大分子物質(zhì)去除的更好,而對(duì)于某些小分子蛋白卻無(wú)法徹底的清除。

圖1 MAS方法與常規(guī)SPE及蛋白直接沉淀法蛋白去除效果比較色譜圖
藍(lán)色為直接蛋白沉淀;綠色為HLB凈化;粉色為MAS柱管形式凈化;墨綠色為MAS離心管形式凈化
MAS方法的開(kāi)發(fā)正是為了解決這一問(wèn)題,可以看到,MAS方法處理過(guò)的樣品色譜圖在2.5分鐘后幾乎沒(méi)有任何干擾,而在2.5分鐘前的干擾峰也比直接蛋白沉淀方法有了明顯的減少。這是因?yàn)?/FONT>MAS方法同時(shí)結(jié)合了蛋白沉淀與SPE吸附,酸化乙腈既作為蛋白沉淀劑又等同于提取液,且方法簡(jiǎn)單,快速,便于操作,實(shí)驗(yàn)證明對(duì)于血漿中的雷尼替丁有很好的添加回收率。同時(shí)通過(guò)質(zhì)譜掃描磷脂的特征離子,如圖2可以看出比較蛋白直接沉淀方法和反相SPE方法,磷脂特征離子的響應(yīng)值有一至兩個(gè)數(shù)量級(jí)的減小。

圖2 一級(jí)質(zhì)譜掃描圖m/z=496 特征離子比較





