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HPLC 故障及排除方法介紹

   2026-03-05 上海普迪生物技術(shù)有限公司885
診狀
可能的原因
解 決 方 法
（ 一 ）
保留時間變化
1. 柱溫變化
柱恒溫
2. 等度與梯度間未能充分平衡
至少用 10 倍柱體積的流動相平衡柱
3. 緩沖液容量不夠
用 >25mmol/L 的緩沖液
4. 柱污染
每天沖洗柱
5. 柱內(nèi)條件變化
穩(wěn)定進(jìn)樣條件 , 調(diào)節(jié)流動相
6. 柱快達(dá)到壽命
采用保護(hù)柱
（ 二 ）
保留時間縮短
1. 流速增加
檢查泵 , 重新設(shè)定流速
2. 樣品超載
降低樣品量
3. 鍵合相流失
流動相 PH 值保持在 3~7.5 檢查柱的方向
4. 流動相組成變化
防止流動相蒸發(fā)或沉淀
5. 溫度增加
柱恒溫
（ 三 ）
保留時間延長
1. 流速下降
管路泄漏 , 更換泵密封圈 , 排除泵內(nèi)氣泡
2. 硅膠柱上活性點(diǎn)變化
用流動相改性劑 , 如加三乙胺 , 或采用堿至鈍化柱
3. 鍵合相流失
同前 （ 二 ）3
4. 流動相組成變化
同前 （ 二 ）4
5. 溫度降低
同前 （ 二 ）5
（ 四 ）
出現(xiàn)肩峰或分叉
1. 樣品體積過大
用流動相配樣 , 總的樣品體積小于第一峰的 15%
2. 樣品溶劑過強(qiáng)
采用較弱的樣品溶劑
3. 柱塌陷或形成短路通道
更換色譜柱 , 采用較弱腐蝕性條件
4. 柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效
更換燒結(jié)不銹鋼 , 加在線過濾器 , 過濾樣品
5. 進(jìn)樣器損壞
更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子
（ 五 ）
鬼峰
1. 進(jìn)樣閥殘余峰
每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥 , 改進(jìn)閥和樣品的清洗
2. 樣品中未知物
處理樣品
3. 柱未平衡
重新平衡柱 , 用流動相作樣品溶劑 （ 尤其是離子對色譜 ）
4. 三氟乙酸 （TFA） 氧化 （ 肽譜 ）
每天新配 , 用抗氧化劑
5. 水污染 （ 反相 ）
通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量,用 HPLC 級的水
（ 六 ）
 
基線噪聲
1. 氣泡 （ 尖銳峰 ）
流動相脫氣 , 加柱后背壓
2. 污染 （ 隨機(jī)噪聲 ）
清洗柱 , 凈化樣品 , 用 HPLC 級試劑
3. 檢測器燈連續(xù)噪聲
更換氘燈
4. 電干擾 （ 偶然噪聲 ）
采用穩(wěn)壓電源 , 檢查干擾的來源 （ 如水浴等 ）
5. 檢測器中有氣泡
流動相脫氣 , 加柱后背壓
（ 七 ）
峰拖尾
1. 柱超載
降低樣品量 , 增加柱直徑采用較高容量的固定相
2. 峰干擾
清潔樣品 , 調(diào)整流動相
3. 硅羥基作用
加三乙胺 , 用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相 PH 值 , 鈍化樣品
4. 同前 （ 四 ）4
同前 （ 四 ）4
5. 同前 （ 四 ）3
5. 同前 （ 四 ）3
6. 死體積或柱外體積過大
連接點(diǎn)降至最低 , 對所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整 , 盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管
7. 柱效下降
用較低腐蝕條件 , 更換柱 , 采用保護(hù)柱
（ 八 ）
峰展寬
1. 進(jìn)樣體積過大
同 （ 四 ）1
2. 在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展
進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散
3. 數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢
設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于 10 點(diǎn)
4. 檢測器時間常數(shù)過大
設(shè)定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的 10%
5. 流動相粘度過高
增加柱溫 , 采用低粘度流動相
6. 檢測池體積過大
用小體積池 , 卸下熱交換器
7. 保留時間過長
等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8. 柱外體積過大
將連接管徑和連接管長度降至最小
9. 樣品過載
進(jìn)小濃度小體積樣品
 
標(biāo)簽： HPLC ,故障,排除
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