氣相:

分離能力好、靈敏度高、分析速度快、操作方便等。

受技術(shù)條件的限制，沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進(jìn)行分析，一般對(duì)500℃以下不易揮發(fā)或受熱易分解的物質(zhì)部分可采用衍生化法或裂解法。

液相:

高效液相色譜法只要求試樣能制成溶液，而不需要?dú)饣?/span>，因此，不受試樣揮發(fā)性的限制。對(duì)于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對(duì)分子量大(大于400以上)的有機(jī)物(些物質(zhì)幾乎占有機(jī)物總數(shù)的75%~80%)原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來進(jìn)行分離、分析。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在已知化合物中能用氣相色譜分析的約占20%而能用液相色譜分析的約占70~80%。

（一）氣相

由載氣源、進(jìn)樣部分、色譜柱、柱溫箱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。進(jìn)樣部分、色譜柱和檢測器的溫度均在控制狀態(tài)。

1.柱箱:

色譜柱是氣相色譜儀的心臟，樣品中的各個(gè)組份在色譜柱中經(jīng)過反復(fù)多次分配后得到分離從而達(dá)到分析的目的，柱箱的作用就是安裝色譜柱。由于色譜柱的兩端分別連接進(jìn)樣器和檢測器，因此，進(jìn)樣器和檢測器的下端(接頭)均插入柱箱。柱箱能夠安裝各種填充柱和毛細(xì)管柱，并且操作方便。色譜柱(樣品)需要在一定的溫度條件下工作，因此，采用微機(jī)對(duì)柱箱進(jìn)行溫度控制。并且由于設(shè)計(jì)合理，柱箱內(nèi)的梯度很小。

對(duì)于一些成份復(fù)雜、沸程較寬的樣品，柱箱還可進(jìn)行三階程序升溫控制。且程序設(shè)定后自動(dòng)運(yùn)行無需人工干預(yù)，降溫時(shí)還能自動(dòng)后開門排熱。

2.進(jìn)樣器:

進(jìn)樣器的作用是將樣品送入色譜柱。如果是液體樣品，進(jìn)樣器還必須將其汽化。因此，采用微機(jī)對(duì)進(jìn)樣器進(jìn)行溫度控制。

根據(jù)不同種類的色譜柱及不同的進(jìn)樣方式，共有五種進(jìn)樣器可供選擇:

填充柱進(jìn)樣器

毛細(xì)管不分流進(jìn)樣器附件；

毛細(xì)管分流進(jìn)樣器附件；

毛細(xì)管分流/不分流進(jìn)樣器；

六通閥氣體進(jìn)樣器；

3.檢測器:

檢測器的作用是將樣品的化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)化為物理信號(hào)(電信號(hào))。

檢測器也需要在一定的溫度條件下才能正常工作，因此，采用微機(jī)對(duì)檢測器進(jìn)行溫度控制。

根據(jù)各種樣品的化學(xué)物理特性，共有五種檢測器可供選擇:

氫火焰離子化檢測器(FID)

熱導(dǎo)檢測器(TCD)

電子捕獲檢測器(ECD)

氮磷檢測器(NPD)

火焰光度檢測器(FPD)

4.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：

該系統(tǒng)可對(duì)測試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。

（二）液相

高效液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。

1.進(jìn)樣系統(tǒng)

一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作進(jìn)樣量是恒定的。

這對(duì)提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。

2.輸液系統(tǒng)

該系統(tǒng)包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l.47~4.4X107Pa流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動(dòng)相通過層析柱時(shí)，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動(dòng)速度，這對(duì)提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動(dòng)相貯存錯(cuò)和梯度儀，可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度、pH值或改用

3.分離系統(tǒng)

該系統(tǒng)包括：色譜柱、連接管和恒溫器等。

色譜柱一般長度為10~50cm(需要兩根連用時(shí)，可在二者之間加一連接管)內(nèi)徑為2~5mm，由優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，柱內(nèi)裝有直徑為5~10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成)，固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠構(gòu)成，它們都有惰性(如，硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性和比表面積大的特點(diǎn)，加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣)或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如，磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機(jī)化合物。

因此，這類固定相對(duì)結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性，例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來。

另外，固定相基質(zhì)粒小，柱床極易達(dá)到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)。基質(zhì)粒度小、微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對(duì)縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大。

這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小，會(huì)提高分辨率的道理。再者，高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60℃通過改善傳質(zhì)速度，縮短分析時(shí)間，就可增加層析柱的效率。

4.檢測系統(tǒng)

高效液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種：

(1)紫外檢測器

該檢測器適用于對(duì)紫外光(或可見光)有吸收性能樣品的檢測。

其特點(diǎn):使用面廣(如，蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用)；靈敏度高(檢測下限為10^-10g/mL)；線性范圍寬;對(duì)溫度和流速變化不敏感；可檢測梯度溶液洗脫的樣品。

(2)示差折光檢測器

凡具有與流動(dòng)相折光率不同的樣品組分，均可使用示差折光檢測器檢測。糖類化合物的檢測使用此檢測系統(tǒng)。這一系統(tǒng)通用性強(qiáng)、操作簡單，但靈敏度低(檢測下限為10^-7g/mL)流動(dòng)相的變化會(huì)引起折光率的變化。因此，它既不適用于痕量分析，也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。

(3)熒光檢測器

凡具有熒光的物質(zhì)，在一定條件下，其發(fā)射光的熒光強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度成正比。因此，這一檢測器只適用于具有熒光的有機(jī)化合物(如，多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質(zhì)等)的測定，其靈敏度很高(檢測下限為10^-12~10^-14g/mL）痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用。

5.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

該系統(tǒng)可對(duì)測試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。