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DNA合成儀合成原理
2025-12-09
上海普迪生物技術有限公司
635
DNA合成儀合成原理:
DNA的
固相合成
:即DNA3'端固定于基質上,然后沿3'向5'方向依次添加
核苷酸
直至合成所需的DNA片段。不同于應用
DNA聚合酶
的DNA合成。
合成過程:
第一個堿基的3‘末端固定在樹脂上,下一個堿基的5’-OH用二對甲氧三苯甲基DMT保護,堿基上的氨基用
苯甲酸
保護,然后對3‘-OH用氨基磷酸化合物進行活化。
1.1個堿基的5’-OH和下個堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯,
2.然后用碘氧化成磷酸三酯
3.加入
二氯乙酸
除去第二個堿基5’-OH上的保護劑DMT
循環進行加入下一個堿基合成完畢后
1.用
苯硫酚
除去5’-OH上的保護劑DMT
2.用濃氫氧化銨將片段與固體樹脂斷開,洗脫
3.用濃氫氧化銨在加熱的條件下除去堿基上的保護劑
4.除去氫氧化銨,真空抽干
5.
液相色譜
或者PAGE,回收片段最長的。
標簽:
DNA,合成儀
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